Fondata da cardinale Federico Borromeo, aprì al pubblico nel lontano 1609. La biblioteca ha carattere storico-letterario, con specializzazione in letteratura classica. Oltre ai giorni e periodi indicati, la veneranda Biblioteca Ambrosiana resta chiusa dal Giovedì Santo alla domenica dopo Pasqua; nel periodo delle ferie estive (variabile di anno in anno).